根據(jù)親本雜合、純合情況選擇分離群體類型：

（一）親本雜合的物種，如林木、水產(chǎn)、果樹等異花授粉、蟲媒、風(fēng)媒授粉、雌雄異體物種，一般采用F1。

（二）親本純合物種，如水稻、豆類等自花授粉，分離群體可用F2、BC、RIL、DH、巢式群體等。

兩個(gè)親本推10-20×，子代測(cè)序深度看物種基因組組裝程度，如果組裝結(jié)果不好的話，大部分片段都比較短，可能最后會(huì)影響遺傳圖譜的結(jié)果，推薦測(cè)序深度3X以上，如果基因組裝到染色體水平或者N50達(dá)到Mb級(jí)別測(cè)1×就可以了。

需要，9311基因組雖然出來(lái)，但是9311有很多不同類型的突變，比如有的有芒，有的無(wú)芒，建議老師測(cè)，但是測(cè)序深度可以稍微降低。

大部分QTL定位方法只是要求表型數(shù)據(jù)中的隨機(jī)誤差項(xiàng)服從正態(tài)分布，并沒有要求表型數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布。數(shù)量性狀只有在多基因假說(shuō)下才真正符合正態(tài)分布，表型數(shù)據(jù)的非正態(tài)性并不影響QTL定位。

包含偏分離不顯著的標(biāo)記，顯著偏分離的標(biāo)記會(huì)被過(guò)濾掉。偏分離是自然界非常普遍存在的現(xiàn)象，并被認(rèn)為是生物進(jìn)化的動(dòng)力之一。產(chǎn)生偏分離的原因主要有兩個(gè)方面：配子選擇和合子選擇，其中配子選擇主要包括花粉致死、花粉管競(jìng)爭(zhēng)和選擇性受精。除了上述原因以外，環(huán)境因素、非同源重組、基因轉(zhuǎn)換、轉(zhuǎn)座因子、轉(zhuǎn)基因沉默、體外孤雄生殖過(guò)程中的選擇壓、非整倍體或不穩(wěn)定易位造成的染色體不穩(wěn)定等都有可能是導(dǎo)致偏分離。

通過(guò)共線性分析，將遺傳圖譜上的標(biāo)記與初步組裝得到的scaffold進(jìn)行比對(duì)，統(tǒng)計(jì)不同scaffold上的標(biāo)記數(shù)目，得到不同連鎖群上被錨定的scaffold信息，一個(gè)scaffold上如果錨定兩個(gè)以上的標(biāo)記，該scaffold的位置和方向均可以被定位到染色體水平。只有1個(gè)標(biāo)記則只能定位到位置，方向不能確定。如果沒有錨定到標(biāo)記，則該scaffold仍然不能被定位到染色體水平，說(shuō)明該scaffold多態(tài)性可能較差，需要構(gòu)建更加精細(xì)的遺傳圖譜。

判斷標(biāo)記是否偏分離是采用的卡方檢驗(yàn)，卡方檢驗(yàn)的顯著性P值越小，越證明該標(biāo)記偏分離嚴(yán)重，因此P值小于0.001的標(biāo)記要少于P值小于0.01的標(biāo)記的數(shù)量。在進(jìn)行過(guò)濾的時(shí)候如果按照P值<0.001過(guò)濾，剩余的標(biāo)記會(huì)更多，因此是比較寬松的過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)，反之，按照P值<0.01過(guò)濾，會(huì)過(guò)濾掉更多的標(biāo)記，是更為嚴(yán)格的過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)。

取F2的葉片，F(xiàn)2:3家系的表型平均值作為F2的表型，群體要隨機(jī)取樣（F2:3家系是指F2代群體中，每個(gè)F2代植株自交又產(chǎn)生的各自的F3群體組成的群體，這個(gè)F3是與上一代F2所對(duì)應(yīng)的，所以也稱為F2:3家系，他們是不能混在一起的，混在一起就叫F3了，而不是F2:3。這種群體主要是用于初步定位的，對(duì)于單顯性基因控制的質(zhì)量性狀定位效果很好。）

無(wú)需建立BAC庫(kù)，親本重測(cè)序可以獲得QTL區(qū)域的基因序列，進(jìn)行基因預(yù)測(cè)和后續(xù)標(biāo)記開發(fā)轉(zhuǎn)基因驗(yàn)證等工作。

1）表達(dá)數(shù)量性狀基因座（expression Quantitative Trait Loci,eQTL）是指的是染色體上一些能特定調(diào)控mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平的區(qū)域，其mRNA/蛋白質(zhì)的表達(dá)水平量與數(shù)量性狀成比例關(guān)系，將各基因型的表達(dá)數(shù)據(jù)作為一個(gè)數(shù)量性狀，利用傳統(tǒng)的QTL分析方法進(jìn)行分析。eQTL可分為順式作用eQTL和反式作用eQTL，順式作用eQTL就是某個(gè)基因的eQTL定位到該基因所在的基因組區(qū)域，表明可能是該基因本身的差別引起的mRNA水平變化；反式作用eQTL是指某個(gè)基因的eQTL定位到其他基因組區(qū)域，表明其他基因的差別控制該基因mRNA水平的差異。

2）基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的關(guān)聯(lián)分析是從SNP關(guān)聯(lián)分析與GEM關(guān)聯(lián)分析兩個(gè)水平實(shí)現(xiàn)的，開發(fā)的SNP位于基因編碼區(qū)域，SNP與基因(或Unigene)所屬關(guān)系是已知，加上基因表達(dá)水平的關(guān)聯(lián)分析就能夠?qū)崿F(xiàn)功能基因的精細(xì)定位。

主要有四款：R-qtl、MapQTL、WinQTLcart和ICiMapping。

這是由于標(biāo)記的子代分型依賴于親本的分型造成的。遺傳圖中每一個(gè)標(biāo)記的子代分型首先要根據(jù)親本的分型來(lái)進(jìn)行分型判斷，因此親本分型的準(zhǔn)確性就很重要，是依靠高深度的測(cè)序來(lái)確保親本分型的準(zhǔn)確性，因此在測(cè)序的時(shí)候要比子代的測(cè)得多。