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微生物QPCR

快速、準(zhǔn)確地測(cè)定目標(biāo)微生物數(shù)量

微生物QPCR簡(jiǎn)介

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-time Quantitative PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入可與DNA產(chǎn)物特異性結(jié)合的熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最終通過相對(duì)定量或絕對(duì)定量的方法確定各個(gè)樣本的本底表達(dá)量。微生物QPCR可用于快速、準(zhǔn)確地測(cè)定目標(biāo)微生物數(shù)量。

結(jié)果展示

目的基因的 qPCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，16s 標(biāo)準(zhǔn)品的制備及樣品的 qPCR 擴(kuò)增（左：擴(kuò)增曲線、右：熔解曲線）
標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線
目的基因的擴(kuò)增曲線
目的基因的擴(kuò)增曲線
目的基因的溶解曲線
目的基因的溶解曲線
基因標(biāo)準(zhǔn)曲線
基因標(biāo)準(zhǔn)曲線：拷貝數(shù)log值
拷貝數(shù)換算
拷貝數(shù)換算

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)豐富，水體、土壤、糞便等樣本類型均可承接；

每個(gè)反應(yīng)均為3個(gè)重復(fù)，結(jié)果穩(wěn)定性好；

SYBR 熒光染料法和 Taqman 探針法兩種方法均可提供。

微生物QPCR常見問題

相對(duì)定量?jī)?nèi)參選擇標(biāo)準(zhǔn)是什么？

  1. 在不同處理中表達(dá)穩(wěn)定性較高的基因；
  2. 中等或高表達(dá)基因。

真核生物常見內(nèi)參：18S rRNA、β-actin、GAPDH、EF-1α等；原核生物：16S rRNA、gyrB等。如果無(wú)法確定內(nèi)參，建議參考文獻(xiàn)，或者做內(nèi)參篩選實(shí)驗(yàn)。

如何選擇適合的引物和探針？

引物和探針的選擇需要考慮到目標(biāo)微生物的特異性和保守性。可以使用公開可獲得的微生物基因數(shù)據(jù)庫(kù)，如NCBI，進(jìn)行引物和探針設(shè)計(jì)。此外，確保引物和探針的互補(bǔ)性和避免引物之間的重疊和相互作用也很重要。

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