常規(guī)的相對(duì)豐度分析忽略了不同樣本之間總體微生物量存在的現(xiàn)實(shí)差異,造成了分析結(jié)果的偏差。而絕對(duì)定量分析則是計(jì)量樣本每種微生物的16S基因拷貝數(shù)或者細(xì)胞數(shù)目,從而實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量,因此相對(duì)于常規(guī)16S相對(duì)定量擴(kuò)增子測(cè)序,絕對(duì)定量分析能反映樣本每種微生物的真實(shí)數(shù)量和組間樣本的真實(shí)差異。
百邁客運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)和spike-in內(nèi)標(biāo)法實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌的絕對(duì)定量。通過(guò)在樣品中加入已知拷貝數(shù)的spike-in內(nèi)參序列,與樣品同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增、建庫(kù)測(cè)序,然后通過(guò)內(nèi)參的理論拷貝數(shù)與測(cè)序tags數(shù),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品的組織、核酸、擴(kuò)增用量等計(jì)算得到OTUs/ASVs的絕對(duì)拷貝數(shù)表。能夠一次獲得所有細(xì)菌的絕對(duì)定量結(jié)果,包括總豐度和每種菌的豐度。
產(chǎn)品類型 | 支持區(qū)域 | 數(shù)據(jù)量 | 分析內(nèi)容 |
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細(xì)菌絕對(duì)定量(三代) | 16S全長(zhǎng) | 1W CCS | 常規(guī)擴(kuò)增子分析+絕對(duì)定量 |
細(xì)菌絕對(duì)定量(二代) | 16S V3-V4,16S V4 | 5W tags | 常規(guī)擴(kuò)增子分析+絕對(duì)定量 |
組織類型 | 送樣量 |
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土壤 | 1~2g |
糞便 | 0.5~2g |
備注:上述組織送樣量均為三次提取的量