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ONT 測(cè)序(Oxford Nanopore Technologies,簡(jiǎn)稱ONT)是新一代基于納米孔的單分子實(shí)時(shí)電信號(hào)測(cè)序技術(shù)。自從2017年3月開啟ONT平臺(tái)研發(fā)立項(xiàng)以來,百邁客不斷探索與前進(jìn),一路披荊斬棘,經(jīng)過近四年時(shí)間的沉淀與磨礪,現(xiàn)已成績(jī)斐然。
近日,ONT官方再次更新PromethION測(cè)序芯片,該芯片將有效提升單cell測(cè)序產(chǎn)量,為更快速獲得更多數(shù)據(jù)提供可能(詳情點(diǎn)擊:【NCM 2020大會(huì)快訊】99.1%單序列準(zhǔn)確度,PromethION測(cè)序10 Tb數(shù)據(jù)新記錄,更多詳細(xì)內(nèi)容請(qǐng)看NCM2020大會(huì)視頻:https://v.qq.com/x/page/q3210vougvi.html)。2020年12月25日,全新測(cè)序芯片成功抵達(dá)百邁客青島分公司,在快馬加鞭下現(xiàn)已成功完成搶鮮測(cè)試。接下來將由小編帶領(lǐng)大家看看ONT更新后的實(shí)際效果吧!

 

關(guān)于產(chǎn)量

三代測(cè)序儀以其超長(zhǎng)讀長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì),在基因組學(xué)中備受青睞。Nanopore平臺(tái)借助單個(gè)分子通過納米孔時(shí)引起孔兩側(cè)電位差來實(shí)現(xiàn)信號(hào)檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)測(cè)序。因Nanopore測(cè)序讀長(zhǎng)更長(zhǎng)且通量高的特點(diǎn),近幾年在基因組組裝應(yīng)用中嶄露頭角。

百邁客全新R9芯片單cell數(shù)據(jù)量由之前的97Gb提升至178 Gb,產(chǎn)量提升近2倍。R10芯片單cell數(shù)據(jù)量也達(dá)到了80 Gb。更長(zhǎng)的讀長(zhǎng),更高的產(chǎn)量將使得高重復(fù)大基因組更易被解析。

表1 同一樣品不同芯片對(duì)比產(chǎn)出情況(Denovo 30Kb 文庫)

表2 不同樣品及試劑盒產(chǎn)出情況統(tǒng)計(jì)

關(guān)于質(zhì)量值

本次更新不僅是有了量的突破,同時(shí)也有了質(zhì)的飛躍,Oxford Nanopore近期發(fā)布了一款名為Bonito CRF的新算法,基于大數(shù)據(jù)進(jìn)行準(zhǔn)確度訓(xùn)練,可有效提高對(duì)單條讀長(zhǎng)序列識(shí)別(在DNA單分子上確定堿基序列過程)的準(zhǔn)確性。通過與最常用的basecalling軟件比對(duì)可以發(fā)現(xiàn),Bonito可以有效提升序列識(shí)別的準(zhǔn)確性,使得高準(zhǔn)確性基因組組裝成為可能。

表3 新舊Basecalling軟件對(duì)同一數(shù)據(jù)識(shí)別準(zhǔn)確性比對(duì)

為了比較兩種新版本測(cè)序芯片準(zhǔn)確性情況,百邁客研究團(tuán)隊(duì)對(duì)新版本R9與R10芯片進(jìn)行basecalling,結(jié)果不難發(fā)現(xiàn)同一芯片下,Bonito比Guppy提升了~9%,而R10準(zhǔn)確性已突破90%。

表4 新R9.4.1及R10 basecalling結(jié)果比對(duì)


圖1 同一樣本R9.4.1 vs R10 原始產(chǎn)出質(zhì)量值對(duì)比

Bonito下R10準(zhǔn)確率數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),容小編在這里小小的賣個(gè)關(guān)子,下次揭曉謎底~ 可以預(yù)見的是,R10結(jié)合Bonito將在更廣泛的基因組范圍內(nèi)獲得一致的高精度結(jié)果!后續(xù)小編將會(huì)系統(tǒng)的展示高質(zhì)量下基因組的組裝結(jié)果及情況,后續(xù)更多數(shù)據(jù)及結(jié)果敬請(qǐng)期待!
百邁客作為ONT全球戰(zhàn)略合作伙伴,將繼續(xù)為所有的科研工作者提供更長(zhǎng)更準(zhǔn)的測(cè)序及分析服務(wù)。

百邁客與ONT戰(zhàn)略合作簽約合影

(右下:百邁客CEO鄭洪坤先生;左下:牛津納米孔CEO Gordan Sanghera博士)


百邁客自2018年8月與牛津納米孔公司達(dá)成長(zhǎng)期合作,擁有MinION、GridION X5和PromethION三種型號(hào)全套納米孔測(cè)序儀。更是中國(guó)大陸全部通過PromthION/GridION平臺(tái)及DNA/RNA產(chǎn)品官方認(rèn)證的公司。

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